چکیده
بیماری ویروسی سپتی‌سمی‌هموراژِی (VHS) یکی از مهم¬ترین بیماری¬های این ماهی است که اخیرا در ایران شیوع گسترده-ای یافته وخسارت های بسیار سنگینی را بر پرورش¬دهندگان تحمیل کرده است. به منظور شناسایی و اطمینان از وجود عامل بروز این تلفات، نمونه برداری از مزارع پرورشی استان چهارمحال و بختیاری- که کانون اصلی همه¬گیری و تلفات بالا بود صورت گرفت. ماهیان دارای علایم بالینی انتخاب و اندام¬های، کلیه قدامی، طحال، قلب و مغز آن¬ها جدا و در الکل ۷۰ درصد ذخیره شدند. بر اساس آزمایش RT-PCR، بیماری VHS تایید شد؛ سپس برای استفاده در بررسی سرولوژیک VHS، یک قطعه از ژن نوکلئوکپسید(N) ویروس VHS، با پرایمرهای پیشنهادی OIE و اندکی تغییر، تکثیر و قطعه مورد نظر در وکتور PMAL-C۲X کلون و سپس در باکتری اشیرشیاکلی Rosetta بیان گردید. پروتئین بیانی با كمك ستون كروماتوگرافي رزين آميلوز خالص شد. پروتئين هدف با وزن KDa۶۱ ازطريق SDS-PAGEو متعاقب آن ايمونوبلاتينگ ارزيابي شد. مشاهده بيان پروتئين با وزن ملكولي قابل انتظار در SDS-PAGE و واكنش مثبت اين پروتئين با سرم موش ایمن شده با پروتئین MBP در ايمونوبلات نشان دهنده بيان موفق اين قطعه از پروتئين در باکتری اشیرشیاکلی بود.
واژگان کلیدی
کلون و بیان اشیرشیاکلی قزل آلا ویروس سپتی سمی هموراژی پروتئین نوترکیب نوکلئوکپسید
دریافت فایل مقاله
دسترسی آزاد
دریافت فایل مقاله